ESTABILIDADE DE DNA NUCLEAR E MITOCONDRIAL EM PELOS DE VEADO-CATINGUEIRO POR PCR EM TEMPO REAL

Resumo

Introdução: O veado-catingueiro (Subulo gouazoubira) é um cervídeo neotropical de pequeno porte e ampla distribuição geográfica, reconhecida por sua elevada plasticidade ecológica, o que permite adaptar-se a ambientes modificados. Contudo, apresenta comportamento arredio, sendo de difícil observação em campo, além de ser um animal sensível ao estresse (1). Nesse contexto, métodos não invasivos, como a coleta de pelos é uma fonte valiosa de informações biológicas, aplicável a estudos genéticos, sendo uma alternativa promissora para a conservação de espécies ameaçadas de extinção (2). Dessa forma, o objetivo deste estudo foi avaliar a estabilidade de DNA nos pelos de veado-catingueiro acondicionados à seco em temperatura ambiente por até 96 horas. Material e Métodos: Pelos de exemplares de veados-catingueiros (n=4) foram obtidos através de fita adesiva (CEUA n.31032.000283/2025-11, SISBIO n.94326-1) e avaliados sob estereomicroscópio para a presença do bulbo folicular. As amostras foram organizadas em 5 grupos de 20 pelos cada e acondicionados em tubos plásticos, à seco, em temperatura ambiente (~27ºC), por até 96h. Para avaliar a estabilidade do DNA nas amostras, a extração foi realizada em 0, 24, 48, 72 e 96 horas de armazenamento, utilizando o PureLink Genomic DNA purification Mini Kit, de acordo com as instruções do fabricante. Todas as amostras foram analisadas através de espectrofotometria, com o intuito de verificar a concentração e qualidade do DNA. Adicionalmente, as amostras de DNA foram submetidas a amplificação por PCR em tempo real (qPCR) do gene nuclear GAPDH (gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase) e do gene mitocondrial ATP6 (subunidade 6 da enzima ATP sintase). A análise dos resultados foi feita pelo teste de ANOVA seguido do teste de Tukey com p<0,05. Resultados: As quantificações de DNA total, obtidas por espectrofotometria estão plotadas na Figura 1 para os diferentes grupos, apresentando uma concentração média± E.P. de 7,32±0,63 ng/µL. Os valores obtidos através de qPCR estão apresentados na Figura 2, com média± E.P. de 19,69±2,30 ng/µL e 22,58±2,86 ng/µL, para as amplificações do GAPDH e do APT6, respectivamente. Discussão: Os resultados mostraram que os rendimentos médios de DNA não diferiram significativamente nos diferentes tempos de armazenamento quando comparadas ao grupo 0h (Figura 1). Corroborando com nossos resultados, um estudo com ursos pardos (Ursus arctos) indicou que a concentração de DNA em amostras de pelos só diminuiu após 6 meses de armazenamento (3). Na análise por qPCR, as concentrações de DNA obtidas através de amplificação de ambos os genes, nuclear e mitocondrial, produziram resultado similar, não indicando diferença significativas (Figura 2) em relação ao grupo 0h. Estudos anteriores de nossa equipe também amplificaram com sucesso os genes ATP6 e GAPDH em material biológico de veado-catingueiro (4,5). Conclusão: Ambos os tipos de DNA, nuclear e mitocondrial, ficam preservados em amostras de folículos pilosos de veados-catingueiros por até 4 dias (96h), mesmo quando armazenados à seco e em temperatura ambiente de ~27ºC, sem acréscimo de qualquer reagente para conservação das moléculas. Assim, esse tipo de amostra biológica, de obtenção não-invasiva mostra-se muito eficaz para obtenção de material genético em estudos populacionais desses animais, especialmente no Nordeste do Brasil.