ANÁLISE TRIDIMENSIONAL DE FOLÍCULO PILOSO DE VEADO-CATINGUEIRO UTILIZANDO MICROSCOPIA LIGHT SHEET – ESTUDOS PRELIMINARES DE VIABILIDADE CELULAR

Resumo

Introdução: A Microscopia Light Sheet (MLS) é uma moderna ferramenta paraobtenção de imagens tridimensionais de alta resolução, cujo enorme diferencial époder ser aplicada diretamente em tecidos vivos, sem a necessidade de corteshistológicos para o estudo da arquitetura tecidual (1). No presente estudo, foramobtidas imagens inéditas de folículos pilosos de veado-catingueiro (Subulogouazoubira), a mais abundante espécie de cervídeo do bioma da Caatinga. Umavez que essa espécie não é considerada ameaçada de extinção, tem sido bastanteutilizada como modelo experimental, visando contribuir para a conservação decervídeos neotropicais (2). Para esses e outros animais selvagens, o pelo tem sidoconsiderado uma importante fonte de informações biológicas, podendo ser obtidoatravés de métodos conhecidos como “armadilhas de pelos”, com coleta nãoinvasiva e de custo relativamente baixo (3). Nesse contexto, o presente estudoobjetivou realizar a análise tridimensional de folículos pilosos de veado-catingueiroutilizando MLS associada a marcadores fluorescentes para avaliação da viabilidadecelular. Material e Métodos: Pelos de exemplares de veados-catingueiros foramobtidos através de fita adesiva (CEUA n.31032.000283/2025-11, SISBIO n.94326-1)e avaliados sob estereomicroscópio para a presença do bulbo folicular. Apóslavagem em PBS, as amostras foram incubadas com marcador de DNA nuclear(Hoeschst 33342), associado a um dos seguintes marcadores de viabilidade celular:TO-PRO-3 iodide (integridade de membrana plasmática) ou CellTrace Calcein Red-Orange (atividade metabólico-enzimática). Após imersão em agarose 1%, asimagens foram captadas no microscópio Light Sheet 7, com objetiva de 20 x e filtrosde 405, 561 e 638nm, utilizando o software ZEN Black 3.3, por meio de z-stacks. Oprocessamento das imagens foi realizado com utilização dos softwares ZEN Blue3.3 ou FIJI ImageG. Resultados: Imagens tridimensionais após marcação dosnúcleos das células foliculares com o Hoeschst 33342 estão representadas em três
projeções na Figura 1. As marcações fluorescentes mostrando células commembranas plasmáticas lesionadas (células mortas) e com metabolismo enzimáticodetectável (células vivas) estão representadas na Figura 2, associadas ou não comimagens de marcações com Hoechst 33342. Discussão: O folículo piloso é umórgão de origem embrionária mista, formado de múltiplas camadas de células deorigem neuroectodérmica de mesodérmica, podendo ser utilizada como fonte dediferentes tipos celulares (4). O nível de regularidade morfológico-estrutural (5), bemcomo a viabilidade celular (4) dos pelo arrancados vem sendo cada vez maisestabelecidos em amostras humanas. A análise tridimensional do presente estudopermitiu a identificação de algumas das camadas celulares preservadas nesse tipode tecido obtido de cervídeo. Adicionalmente, constatou-se a presença de váriascélulas metabolicamente ativas e viáveis, no tecido à fresco (Figura 2B). As célulascom lesão de membrana plasmática estão especialmente nas camadas maissuperficiais (Figura 2E), sendo, provavelmente, oriundas do processo dearrancamento do pelo. Conclusão: A avaliação da viabilidade celular in situ emfolículos pilosos de veado-catingueiro através de MLS permitiu a constatação dapresença de grande quantidade de células viáveis, que fortalecem a utilizaçãodesse tipo de amostra biológica, especialmente para cultivo e multiplicação emambiente laboratorial.